Elabscience Caspase6活性檢測試劑盒(分光光度法)(E-CK-A386)采用分光光度法,可用于檢測細胞、組織裂解液或其它樣本的caspase 6活性。
檢測原理:
本 caspase 6活性檢測試劑盒是基于caspase6可以催化底物Ac-VEID-pNA產生黃色的 pNA(p-nitroaniline), pNA在405nm附近有強吸收,從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 6的活性。
Caspase 6也稱 Mch-2,最初從人的Jurkat細胞中被發(fā)現(xiàn)。Caspase6的前體被 granzyme B剪切后可以形成活化的caspase 6二聚體,而活化的caspase 6被發(fā)現(xiàn)可以誘導細胞凋亡。Caspase 6可以剪切 PARP和keratin-18,也可以剪切細胞核核被膜上的關鍵組成蛋白Lamin A。Caspase 家族中僅caspase 6可以剪切Lamin A。
保存條件:
-20°C 可保存一年。Ac-VEID-pNA (4 mM)應適當分裝并避光保存,避免反復凍融。
注意事項 :
1. 所有待檢樣本都需檢測蛋白濃度,由于樣本裂解液中含有還原劑,不適合使用 BCA 法進行蛋白濃度測定,推薦使用考馬斯亮藍法(Bradford法)。
2. 建議在正式實驗前,選擇 2~3 個預期差異大的樣本進行 預實驗,若樣本吸光值超過標準曲線的測量范圍,則需 稀釋樣本或者調整上樣量再進行測定。
3. 進行caspase 6活性測定的樣本,其蛋白濃度應在1~4 mg/mL,否則會影響實驗結果的準確性。
4. 一次實驗的細胞數(shù)目建議不低于1×106個,組織樣本不低于50mg,以便達到 1~4 mg/mL 的蛋白濃度。否則會影響實驗的精準度,導致蛋白濃度過低,反應體系內活性caspase 6過少而OD值偏低。
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